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生化分析仪酶测试不准确原因分析
更多相关文章    时间:2010/4/29 9:21:41,点击:0

       在生化分析测量中,酶的测定比较复杂,要求条件较高,测试比较困难。一般生化分析仪只要酶的测定准确,重复性好,其它项目的测定一般都会没有问题。现就生化分析仪酶分析中常见的测试不准确、重复性差的几点原因进行分析,以供使用者和维修工程师参考。

       生化分析仪酶的测定一般用动力学法进行测试,其原理是在酶反应的最适条件下,用物理、化学或酶促反应的分析方法,在反应速度恒定期(零级反应期)来连续观察和记录一定反应时间内底物或产物量的变化,以单位时间酶反应初速度计算出酶活力的大小和代谢物的浓度。零级反应期,指反应速度与底物浓度的零次方成正比,也就是与底物浓度无关。在零级反应期期间整个反应过程中,反应物可以匀速地生成某个产物,导致被测溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加,减小或增加的速度(ΔA/min)与被测物的活性或浓度成正比。计算方法有两种:

       1)绝对法:

       酶活力(U/L)=ΔA×(反应液体积/样品体积)×(1000/消光系数)

       2)相对法:

       (U/L或mmol/L)=[ΔA(测定)/ΔA(标准)]×标准物的活力或浓度

       因此,生化分析仪酶的测定与许多条件有关。条件的设置,如:波长(单波长、双波长)、温度、参数、测试方法,延迟和测试时间,吸液量等。另外还与厂家的试剂,样品的采集、保存有关,同时与及时进行质控,从一个样品进入另一个样品测试时及时清洗也有很大关系。

       例如GPT的测试一般选择为:波长为340nm,测定时间为20秒,延迟时间为40秒,吸液量为350μl,温度设定为37℃,试剂空白可任意选择。

       因此GPT的测试结果与以下几点有关:

       1、340nm为波长低端,能量较低,同时340nm滤光片使用较多,易老化。所以波长漂移不准,半宽度变化都会影响测量的准确度和重复性。
       2、动态法测试有延迟时间,测试时间要求。延迟时间在动态法中为预反应时间,测试时间在动态法中为测试的总时间。零级动力学法是针对特定时间段而言的,酶反应刚启动时反应比较复杂,杂反应较多,必需经过一段延迟时间才能进入稳定反应期,各试剂商对这两段时间有严格规定。所以动态法测试一般温度在37℃,延迟时间不少于15秒为好。
       3、对于参数的输入应按试剂要求输入其给定值,一般试剂商在试剂盒说明书中给予说明。
       4、反应温度。
       5、测试空白要准确。
       6、吸液量的大小直接影响交叉污染和测量的重复性,建议测试污染性大的物质试剂量应相应增加。一般应大于400μl,一般项目为500μl即可。
       7、测试不准确、重复性差从操作上看主要有:仪器本身原因如比色杯中有气泡;光源灯老化;光源电压不稳;340nm滤光片性能变差,透射性变小;波长不准确等有关。一般检查液路接口是否松动漏气,更换光源灯泡和340nm滤光片即可解决。至于电路问题,加热元件损坏,温度不受控的问题只能由工程师解决。

       总之酶的测定影响准确度的因素很多,只要认真操作,综合分析影响测定的各项因素,认真分析,酶测定的问题不难解决的。根据我们的经验只要试剂、样品准确,保存得当,样品预处理仔细,仪器经常维护、保养,认真操作,问题会自行解决。

 


                                                                                                                                               文章来源:检验医学在线

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