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乳酸的测定方法
更多相关新闻    时间:2008/8/27 14:08:03,点击:0

    乳酸是糖代谢的中间产物,主要来源于骨骼肌、脑、皮肤、肾髓质和红细胞。血液中乳酸浓度和这些组织产生乳酸的速率以及肝脏对乳酸的代谢速度有关,约65%乳酸由肝脏利用。乳酸循环是指葡萄糖在外周组织转化为乳酸,而乳酸在肝脏中又转化为葡萄糖。肝外乳酸通过骨骼肌和肾皮质的氧化作用清除。乳酸产物增加会促进肝对乳酸的清除,但当乳酸浓度超过2mmol/L时,肝脏对其的摄取就会达到饱和。剧烈运动晌,乳酸浓度可在短时间内明显增加,乳酸中毒没有可接受的浓度标准,但一般认为乳酸浓度超过5mmol/L以及PH小于7. 25时提示有明显的乳酸中毒。

    乳酸中毒在下列两类临床情况下发生:A型(缺氧型):常见,与组织氧合作用降低有关,如休克、低血容量和左心室衰竭;B型:与某些疾病(如糖尿病、肿瘤、肝病)、药物或毒物如乙醇、甲醇、水杨酸或先天代谢紊乱(如甲基丙二酸血症,丙酮酸血症和脂肪酸氧化缺陷)有关。机制还不清楚,但推测是线粒体功能缺陷,使氧的利用削弱。乳酸中毒比较常见,住院患者发生率约1%。其所致死亡率超过60%,而如果同时存在有低血压,则死亡率接近100%。

    乳酸中毒另一个不常见但难以诊断的病因是D-乳酸中毒。D-乳酸不由人代谢产生,而是由肠道吸收后在体内积累。D-乳酸可以导致全身性酸中毒,常见于空回肠分流术后,表现为乳酸性脑病(意识模糊、共济失调、嗜睡),并有血浆D-乳酸浓度升高。实际上所有测定乳酸的方法都使用L乳酸脱氢酶,而不能测定D-乳酸。D乳酸可用气液色谱法或用D-乳酸脱氢酶测定。

    脑脊液中乳酸浓度通常与血中乳酸相同。但是当CSF发生生物化学改变时,其乳酸浓度的变化与血中浓度无关。CSF中乳酸浓度上升可见于脑血管意外、颅内出血、细菌性脑膜炎、癫痫和其他一些中枢神经系统疾病。在病毒性脑膜炎,CSF乳酸浓度常不增加。因此,CSF乳酸浓度可用于鉴别病毒性和细菌性脑膜炎。

    一 全血乳酸分光光度法测定

    原理:
    在NAD+存在下,LDH催化乳酸,氧化成丙酮酸。加入硫酸肼捕获产物丙酮酸,并促进反应完成。反应完成后生成的NADH与乳酸为等摩尔,在340nm波长在测定NADH的量,计算乳酸的含量。

    试剂:
    1. 50g/L偏磷酸(MPA):称取50g/L MPA,溶于蒸馏水中,并稀释到100ml,新鲜配制;
    2. 0g/l偏磷酸(MPA):称取30L MPA,溶于蒸馏水中,并稀释到100ml,新鲜配制
    3. tris-硫酸肼缓冲液,在pH9.6(Tris 79mmol/L;硫酸肼4000mol/l):取1mol/l氢氧化钠350ml,加入tris4.79g,硫酸肼26g,EDTA Na2 0.93g,以1mol/l氢氧化纳调至pH9.6,用蒸馏水稀释到500ml,4“C保存可稳定8天;
    4. 27mol/lNAM+溶液:根据需要量称取lNAM+溶于蒸馏水中,4“C可稳定8天
    5. LDH溶液:取LDH原液,用生理盐水稀释成1500u/ml9ru 用sigma型LDH该制品从牛心提取,每ml含10mg蛋白,每mg蛋白具有LDH活性400—600u,用盐水稀释成3mg/ml蛋白即可,如按南京军区总院检验科报道方法,约为1600u/ml,不稀释直接使用;
    6.1mol/l(9.08mg/dl)乳酸的标准液:精确称取L-乳酸锂9.6(或DL--乳酸锂19.2mg),以少量蒸馏水溶解,加入25μL浓硫酸,用蒸馏水稀释至100ml,4“C可稳定长期的保存。

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